【实验动物模型新冠ICR-Tg hACE2转基因小鼠价格】

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠品系简称:ICR-Tg(hACE2)小鼠

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠修饰类型:转基因

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠背景品系: ICR

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠相关基因:human angiotensin-converting enzymez-2,hACE2

血管紧张素转换酶2（ACE2）基因位于X染色体，包含18个外显子，编码由805个氨基酸残基组成的I型跨膜糖蛋白。ACE2是羧肽酶ACE的同源物，一种天然的嵌合蛋白，包括2个结构域：类似ACE的N端活性区和类似COLLECTIN的C端区，这样的双重结构域赋予了ACE2上述两种蛋白的功能。

肾素-血管紧张素系统(RAS)，在维持机体血压稳态、体液和盐平衡方面起着重要作用，据研究报道RAS的异常激活与心血管和肾脏疾病的发病机制相关。而ACE2的主要作用是将血管紧张素II转换为七肽血管紧张素1-7，达到拮抗血管紧张素II的升压，从负向调节RAS系统。

在SARS研究过程中，科学家发现ACE2不仅具有上述羧肽酶活性而且还是SARS-CoV的功能性受体，发现SARS-CoV是通过其表面的S蛋白和靶细胞的表面受体ACE2结合侵入宿主细胞进行感染。可见ACE2不仅在血压和心功能的调节方面扮演了重要角色，而且还是SARS-CoV的功能性受体。

新型冠状病毒据研究发现也是通过ACE2进行感染的，与SARS-CoV相同，并且检测发现ACE2不仅在肺AT2细胞、食管上皮细胞和复层上皮细胞中高度表达，而且在回肠和结肠吸收性肠上皮细胞中也有高表达。

ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠作为SARS-CoV易感的动物模型，与野生型小鼠相比，经鼻腔接种PUMC01株SARS-CoV后，ICR-Tg(hACE2)转基因小鼠动物出现典型的间质性肺炎，hACE2转基因小鼠并伴有肾脏、心脏、肝脏、脑组织和胃肠道等肺外组织的损伤（如附图所示），hACE2转基因小鼠在研究SARS发病机制和抗病毒药物的评价具有重作用。

据研究，ＳＡＲＳ．ＣｏＶ是通过其表面的Ｓ蛋白和靶细胞的表面受体 血管紧张素转换酶２（ＡＣＥ２）结合侵入宿主细胞的，这提示人ＡＣＥ２ （ｈＡＣＥ２）转基因鼠有可能作为对ＳＡＲＳ．ＣｏＶ易感的动物模型，因此 我们进行了ｈＡＣＥ２转基因鼠对ＳＡＲＳ．ＣｏＶ易感性的实验研究并利用 此动物模型探讨了ＳＡＲＳ的发病机制。 本研究主要包括以下三个部分的实验内容： １．ｈＡＣＥ２转基因小鼠的制备和鉴定：选择小鼠ＡＣＥ２（ｍＡＣＥ２）启动 子驱动的ｈＡＣＥ２全长编码序列（Ｃｏｄｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＣＤＳ）基因片断， 通过显微注射的方法，制备携带ｈＡＣＥ２基因的转基因小鼠。经ＰＣＲ 中国医学科学院中国协和医科大学博上学位论文检测到４个阳性首建鼠； ＲＴ－ＰＣＲ及ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ结果显示在其中 一个Ｆｏｕｎｄｅｒ的子代鼠的肺、心、肾和小肠有ｈＡＣＥ２基因表达； Ｒｅａｌｔｉｍｅ—ＰＣＲ检测此Ｆｏｕｎｄｅｒ子代鼠转基因的拷贝数，结果显示为单 拷贝转基因小鼠；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示ｈＡＣＥ２蛋白在转基因小鼠的 不同组织包括肺、心、肾和小肠均有表达；免疫组化显示，在转基因 小鼠的肾脏近曲小管上皮细胞、肺脏小血管内皮细胞可见ｈＡＣＥ２蛋白 表达；无创性血压监测观察发现，ｈＡＣＥ２转基因小鼠的心率、血压与 野生鼠相比未见明显差异；病理组织学检查未发现转基因小鼠心、肺、 肾等器官组织结构异常。 ２．ｈＡＣＥ２转基因小鼠对ＳＡＲＳ－－ＣｏＶ易感性的实验：经鼻腔接种 ＰＵＭＣ０１株ＳＡＲＳ．ＣｏＶ后，野生型和转基因小鼠接种ＳＡＲＳ－－ＣｏＶ后 均未出现死亡现象。在接种后的第３天和第７天，ＲＴ－ＰＣＲ和免疫荧 光试验（ＩＦＡ）结果显示，转基因小鼠肺组织上清的病毒载量和病毒 滴度明显高于野生型小鼠（Ｐ＜Ｏ．０５）；在接种后的第７天，转基因小 鼠的感染率明显高于野生型小鼠（Ｐ＜Ｏ．０１）；转基因小鼠出现典型的 问质性肺炎，而且伴有肾脏、心脏、肝脏、脑组织和胃肠道等肺外组 织的损伤。而部分野生型小鼠只在感染后第三天出现轻微的间质性肺 炎。通过免疫组化染色，在转基因小鼠的肺脏上皮细胞和血管内皮细 胞及大脑神经细胞可发现ＳＡＲＳ—ＣｏＶ抗原：接种病毒后在部分感染小 鼠的血清中可检测到ＳＡＲＳ—ＣｏＶ特异性的抗体ＩｇＧ和Ｉｇｍ，但转基因 小鼠抗体阳性率低于野生型小鼠。上述资料表明，ｈＡＣＥ２转基因小鼠 对ＳＡＲＳ—ＣｏＶ的易感性明显高于野生型小鼠。 中国医学科学院中国协和医科大学博士学位论文 ３．利用ｈＡＣＥ２转基因小鼠探讨非特异性的免疫反应在ＳＡＲＳ发病中 的作用：应用ＥＬＩＳＡ的方法，观察到转基因小鼠接种病毒后，肺组织 上清细胞因子ＩＬ一６、ＴＮＦ—位和ＩＦＮ－１／明显升高；ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和免疫组 化染色检测到转基因小鼠感染ＳＡＲＳ．ＣｏＶ后肺组织一氧化氮合酶 （ｉＮＯＳ）表达明显增强，阳性颗粒主要位于肺泡巨噬细胞；比色法测 定到转基因小鼠感染ＳＡＲＳ．ＣｏＶ后血浆中ＮＯ含量明显增多。 综上所述，ｈＡＣＥ２在我们制备的转基因小鼠体内部分组织表达， 尽管接种病毒后具有缺少病死率的局限性，但ｈＡＣＥ２转基因小鼠的易 感性明显高于野生型小鼠，病理变化与ＳＡＲＳ病人相似。这种模型的 建立对于研究ＳＡＲＳ发病机制和抗病毒药物的评价具有重要的意义。