【大鼠小鼠认知行为学水迷宫巴恩斯旷场跑台训练实验服务】
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跑台在实验研究中的应用越来越多，主要集中在建立运动模型，以及探究运动对生理和病理的作用，以促进运动训练的科学化、竞技体育成绩的提高、运动疗法在疾病康复中合理有效的应用等，同时也是研究运动与代谢，运动与心脑血管病及神经系统疾病的工具。
一、大鼠小鼠认知行为学水迷宫巴恩斯迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验目的
通过声、光、电刺激大鼠在跑台上不停地跑动，来达到训练测试的目的。
二、大鼠小鼠认知行为学巴恩斯迷宫水迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验原理
跑台的主要部分是一个滚动的传送带。表面的材质有利于动物抓地。通道的后壁安装有刺激电极、发声装置及发光的小灯泡，各个通道的刺激装置是彼此独立的。当动物拒绝跑动或者跑速低于实验要求时，就会在传送带上退行而碰触到后壁的刺激装置，较强的电刺激或声音刺激将迫使动物按照跑台的速度奔跑。
三、大鼠小鼠认知行为学巴恩斯迷宫水迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验材料与方法
(一)大鼠小鼠认知行为学巴恩斯水迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验材料
1.大鼠小鼠认知行为学巴恩斯水迷宫跑台训练测试实验设备 动物实验跑台。
2.大鼠小鼠认知行为学巴恩斯水迷宫跑台训练测试实验动物及分组
(1)大鼠或小鼠(本实验以大鼠为例)。
(2)根据实验目的将大鼠分组，一般分为训练组和安静对照组。训练组还可以按照训练强度的不同继续分，并将每只大鼠编号。
(3)分笼饲养，自由饮食，动物房温度21～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照昼夜节律变化。
(二)大鼠小鼠认知行为学巴恩斯水迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验具体方法
(1)打开跑台机器及其相应软件，并将大鼠按其编号放入相应跑道，盖上盖子。 (2)设置相应参数，如时间、速度、电刺激强度等，然后点击开始即可。
(3)训练结束，将大鼠取出，换下一组动物，其他步骤同上。
(4)每周训练5～6d，均安排在晚上。
(三)大鼠小鼠认知行为学巴恩斯水迷宫跑台训练测试实验外包委托技术服务实验操作中的注意事项
(1)选取体重相近的大鼠，体重相近的大鼠生理指标差异不会太大。每周称重一次，观察其体重变化。
(2)正式训练前要有一段适应性训练，给予大鼠适应性的时间。
(3)跑台期间注意看护，防止意外，大鼠夹尾时，要抬高跑台，跑完后用碘伏消毒。
(4)过多的刺激会引起大鼠生理上的变化，如肾上腺素升高。因此，在跑台实验中应当尽量降低刺激强度和刺激频率，尤其是电刺激，一般调为0.5～0.8mA，最多不超过1mA。
(5)大鼠运动期间消耗很大，要及时加粮加水，更换垫料。
(6)根据大鼠生活习性，训练尽量安排在晚上进行。
附实验：跑台训练对脑缺血大鼠神经功能恢复情况及突触素表达的影响
一、实验目的
观察脑缺血大鼠跑台训练后神经功能恢复情况及突触素表达的变化。
二、实验原理
许多研究表明运动训练能够促进脑出血后神经功能的恢复，本实验通过神经功能评分(mNSS)来观察跑台训练对脑出血大鼠神经功能恢复的促进情况，并通过Western blot检测来说明突触素在大鼠恢复过程中所起的作用。
三、实验材料与方法
(一)实验材料
(1)所需设备：动物实验跑台、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰凝胺电泳(SDS-PAGE)。
(2)所需试剂：RIPA裂解液、突触素－抗(兔源)、二抗。
(二)实验具体方法
1.实验动物与分组 健康成年雄性SD大鼠24只，体重(250±20)g，月龄7周(由昆明医科大学实验动物中心提供)。随机分为假手术组、缺血对照组及运动训练组，每组8只。大鼠分笼饲养，自由饮食，动物房温度21～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照昼夜节律变化。
2.模型制备 用3.6％水合氯醛(1ml/100g)腹腔注射麻醉SD大鼠，然后将其固定。采用Longa颈外动脉线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型。假手术组也插入线栓，但深度小于1cm，不阻断大脑中动脉血流。模型建立后3d内给予庆大霉素2万U腹腔注射，防止感染。术后24h对实验动物进行神经行为学评分，将得分为2～4分的动物纳入实验。
3.跑台训练 运动训练组术后先进行3d的适应性训练，速度10m/min，每天20min，第4天开始进行为期20d的正式训练，速度15m/min，每天30min，每周周一至周五晚上6：00～8：00训练，周末休息，共4周。假手术组及缺血组则不进行运动训练。
4.神经功能评分 3组大鼠于术后24h、4d、8d、12d及20d采用改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores, mNSS)评估其神经功能缺损程度。包括运动、感觉和反射检查，通过运动实验、感觉实验、平衡木实验及反射丧失和不正常运动，综合评价神经系统损伤的严重程度，4个项目的总和为最终评分(严重损伤评分为13～18分，中度损伤评分为7～12分，轻度损伤评分为1～6分)。
5.Western blot 各组大鼠经戊巴比妥钠麻醉后断头取脑，取右侧大脑的皮质及海马，－80℃保存，用于Western blot检测。用RIPA裂解液将所取组织进行裂解。水浴匀浆后超声破碎。12000r/min，低温离心15min后取上清液。BCA法测定蛋白质样品浓度，取15μg蛋白质样品加5μl上样缓冲液，100℃煮沸5min。100g/L SDS-PAGE 75V、2h分离蛋白质。350mA、2h转至PVDF膜(millipore)。TBST配制脱脂牛奶封闭2h。TBS稀释突触素一抗(兔源，1：2000)，4℃孵育过夜。TBST洗膜10min，3次。TBS稀释二抗(羊抗兔，1：8000)，室温孵育2h。TBST洗膜10min，3次。使用化学发光显色，凝胶成像系统成像。以β-actin为内对照，成像后获取图片，测定光密度值，用目标条带与β-actin光密度比值反映蛋白质相对表达量，进行组间比较。
(三)实验操作中的注意事项
(1)选取体重相近的大鼠，这样检测结果不会有太大差异。
(2)正式训练前要有一段适应性训练，给予大鼠适应性的时间。
(3)跑台期间注意看护，防止意外，大鼠夹尾时，要抬高跑台，跑完后用碘伏消毒。
(4)过多的刺激会引起大鼠生理上的变化，如肾上腺素升高，因此，在跑台实验中应当尽量降低刺激强度和刺激频率，尤其是电刺激，一般调为0.5～0.8mA，最多不超过1mA。
(5)大鼠运动期间消耗很大，要及时加粮加水。
(四)获得的实验结果
(1)与缺血对照组和运动训练组相比，假手术组基本上没有神经功能缺损症状，术后20d，缺血对照组和运动训练组神经功能恢复明显，后者恢复效果好于前者，差异有统计学意义(P<0.05)，而术后24hA d、8d、12d比较，差异则无统计学意义(P>0.05，表21-1和图21-1)。
(2)通过对不同组别突触素与内参蛋白灰度值比值的统计学分析，发现在运动训练组与缺血对照组，突触素蛋白表达较假手术组低且差异有统计学意义(P<0.01)，运动训练后突触素表达比模型组增加(图21-2)。
结论：跑台训练可改善脑缺血大鼠神经功能评分，上调突触素的表达，促进脑缺血后的神经功能恢复。
