【大小鼠皮下原位异位肺癌荷瘤小鼠模型造模实验外包服务】
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小鼠皮下肿瘤荷瘤实验细胞准备
1. 不同的细胞成瘤能力不同，在选择时应根据实验目的和具体情况综合考虑。如乳腺癌细胞系MCF-7虽然经常用于体外实验，但成瘤虑差，生长慢，因此一般不考虑。
2. 一般分为鼠源的和人源的细胞系，鼠源的一般更容易成瘤，但人源的更贴近人类肿瘤生长情况。
3. 取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增，确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态。一般鼠源肿瘤细胞接种2-100万/只，人源的细胞系需要200-1000万/只以上。可结合细胞和裸鼠的实际情况，最高可以注射1000万/0.1ml，不可再高，因为细胞几乎达到饱和状态。
注意计算好细胞用量，一般要多准备5只裸鼠左右细胞用量。
小鼠皮下肿瘤荷瘤实验裸鼠准备
一般选择5-6w龄的裸鼠，太小死亡率太高，太大免疫力会增强，不易成瘤。如无特殊要求雌雄均可。
接种步骤
1. 胰酶消化细胞，计数后将其重悬于生理盐水中
2. 选择进针部位（一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位），用酒精棉球擦拭进针部位
3. 向前方穿行，注射前针头左右动一下，若无阻力则证明在皮下，否则可能在皮内或肌肉里面
4. 缓慢推注，一般体积为100-150μL，注射完后缓慢拔出针头，可在注射部位看到明显的鼓包
5. 接种点离进针点尽量远一些，防止漏液和污染
结果处理
一般接种5天后即可看到肿瘤出现，根据实验要去的生长天数，达到时间后颈椎脱臼处死裸鼠，取出肿瘤，拍照。拍照时需要放置两把直尺，可用于后期计算肿瘤体积。
问题解答:
（1）瘤子长不出来是怎么回事？
一方面可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系；一方面可能是小鼠周龄太大，或小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）
（2）小鼠瘤子长起来又消失？
肿瘤块先缩小，后变大很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，长不起来建议换鼠。
（3）均一性很差，肿瘤体积差距较大？
如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议重新做实验分组。
（4）是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤？
不可以，一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。
（5）是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长？
如果裸鼠荷瘤不生长，可以参考文献，用免疫抑制剂如环磷酰胺（抑制裸鼠NK细胞活性）促进生长；不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长，因为可能会造成溃烂，这样就不得不中止实验。所以一般情况下，应尽量符合细胞系本身的生长特性，不应过多地人为的干扰。
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